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方法简介
二硫键是通过蛋白质中两个半胱氨酸上的巯基氧化而形成的，是一种重要的蛋白质翻译后修饰。在非还原状态下，用IAA将蛋白质游离的Cys封闭，再分别用Trypsin、Chymotrypsin、Glu-C进行酶切，酶解产物通过质谱检测后进行分析，通过匹配所得到的MS/MS图谱，找出二硫键连接的肽段，确定二硫键的配对方式。
关于样品：请确保蛋白浓度大于1mg/ml， 最小量不得低于50Pmol，蛋白纯度最好大于90%；含盐量：挥发性无机盐<20mM，不挥发性无机盐<5mM；蛋白溶液避免SDS等变性剂，表面活性剂，或其它保护剂，不含tris缓冲体系。
样品运输：请使用足量的干冰运输，并尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。
二硫键配对分析是一种重要的蛋白质分析技术，主要用于研究蛋白质中半胱氨酸残基之间通过硫硫键形成的共价键的连接方式和位点。这种共价键对于稳定多肽的三维构象，维持蛋白质的高级结构和稳定状态至关重要。
在二硫键配对分析中，通常采用质谱法作为主要的分析手段。这种方法结合化学或酶切方法打开特定的二硫键，然后通过分析产生的多肽片段来推测二硫键的配对情况。此外，还可以利用高分辨率质谱技术，结合实验经验，提供高水平的针对多肽药物的二硫键分析解决方案，包括样品制备方法、质谱分析方法以及配套的软件分析。
二硫键配对分析在生物医药领域有着广泛的应用。例如，在抗体类药物的研发和生产过程中，二硫键的正确配对对于单抗分子维持构型和发挥功能非常关键。因此，对二硫键的分析是药物关键质量属性考察的重要内容。
通过二硫键配对分析，我们可以确保多肽药物在生产过程中的质量控制，也可以在研发阶段帮助我们优化药物设计，提高药物的稳定性和活性。这对于促进人类健康和生命科学发展，以及推动精准医疗和科研服务具有重要意义。
