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采用莱卡硬组织切片机(SP1600)和钨钢刀片对包埋的骨组织(可植入金属)、牙齿等硬组织进行切片,之后进行磨片和特殊染色,可用于观察新骨形成、骨组织酶的组织化学检测和医学软硬组织疾病的检测评价等
实验步骤:
1)脱水:组织脱水机中梯度脱水,70%三天、80%三天、90%三天、95%三天、100%三天、100%三天)。
2)二甲苯过夜透明。
3)包埋:
a.将脱水完成后的骨样本依次浸泡于树脂浸塑液Ⅰ、树脂浸塑液Ⅱ及树脂浸塑液Ⅲ中各5天,后将骨样本取出置于50ml离心管中。
b.向离心管中加入预先配制好的包埋液中,将离心管置于50℃水浴箱中直至包埋液全部固定。
4)硬组织切片:
a.包埋成功后将包埋块从离心管中取出,用切片机切片厚度约为150 μm;
b.使用黏合剂将切片放置于有机玻璃载玻片上并压片24 h;
c.利用砂纸手工对硬组织切片进行打磨至切片厚度约为50 μm;最后对切片进行抛光,使其厚度约为20-30 μm;
5)染色液染色
6)镜下进行组织学观察
样品可送4%多聚甲醛固定好的新鲜动物组织样品,若需前处理以及后续的图像采集,则需按照项目内容另外收费。
硬组织病理检测中可能会遇到一些常见问题,这些问题可能会影响结果的准确性和可靠性。以下是一些常见的问题及其可能的原因和解决方案:
样本制备问题:硬组织样本的制备过程中可能会出现一些问题,如切片不均匀、组织碎裂或丢失等。这可能是由于样本固定不当、切片技术不熟练或设备问题引起的。为了解决这个问题,可以优化样本固定和切片技术,使用高质量的设备和试剂,并确保技术人员的熟练度。
染色问题:在硬组织病理检测中,染色是一个重要的步骤。然而,可能会出现染色不均匀、颜色过深或过浅等问题。这可能是由于染色试剂的质量问题、染色时间或温度控制不当引起的。为了解决这个问题,可以检查染色试剂的有效期和质量,优化染色时间和温度,并遵循标准操作流程。
组织处理不当:硬组织样本在处理过程中可能会受到一些物理或化学损伤,导致组织结构改变或抗原丢失。这可能是由于固定时间不足或过长、使用不适当的固定液或处理温度过高引起的。为了避免这些问题,可以优化组织处理条件,确保固定时间、固定液和处理温度的选择合适。
切片质量问题:硬组织样本的切片质量可能会影响病理检测的准确性。切片过厚或过薄、切片不连续或组织折叠等问题都可能导致诊断困难。为了解决这个问题,可以调整切片机的参数,确保切片质量符合要求,并使用高质量的刀片和载玻片。
病理诊断困难:硬组织病理检测中的病理诊断可能会受到一些因素的影响,如组织异质性、病变不明显或罕见病等。这可能需要病理医生具有丰富的经验和专业知识来进行准确诊断。为了提高诊断准确性,可以加强病理医生的专业培训和学习,参考相关文献和专家意见,并与其他专业人员进行交流和讨论。
需要注意的是,以上只是一些常见的硬组织病理检测问题及其解决方案。在实际操作中,可能还会遇到其他特定的问题,需要根据具体情况进行分析和解决。
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