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生物分子相互作用分析是基于SPR原理的新型生物传感分析技术,无须进行标记,也可以无须纯化各种生物组分。在天然条件下通过传感器芯片实时、原位和动态测量各种生物分子如多肽、蛋白质、寡核苷酸、寡聚糖,以及病毒、细菌、细胞、小分子化合物之间的相互作用过程。表面等离子共振是表面增强拉曼的重要增强机理之一,由于贵金属纳米粒子的尺寸效应及量子效应通过激发光照射能引起表面等离子共振,从而大大增强拉曼散射信号,已达到痕量检测的目的。
亲和分子对包括:
蛋白质–蛋白质(Protein–Protein)
多肽–受体(Peptide–Receptor)
抗体–抗原(Antibody–Antigen)
膜受体–配体(Membrane Receptor–Ligand)
蛋白质–小分子(Protein–Small Molecule)
蛋白质–核酸(Protein–Nucleic Acid)
细胞–配体(Cell–Ligand)
任何一对亲和分子,一个(靶分子)被键合在生物传感器表面,另一个(分析物)被置于溶液中。当含有分析物的溶液流经靶分子键合的生物传感器表面时,亲和性复合物生成。
SensiQ配备双通道流动注射分析式微射流系统,内有85nL流动池。SensiQ使用一次性的SPR生物传感器,装卸简便。生物传感器表面包被有单层的羧基化寡聚环氧乙烷(Carboxylated Oligoethyleneoxide)基质,可键合多种生物分子,并有效地阻止非特异性结合及变性。靶生物分子的这种既被键合在固相生物传感器表面,又存在于液相中的方式,增进了两种亲和分子间的接触性,同时避免了由于人为因素所造成的动力学分析的复杂化。
SensiQ备有多种键合方案用于改进实验设计,以支持生物分子的附着。最常用的偶联方式是用EDC/NHS进行胺偶联。其它键合方式,例如顺丁烯二酰亚胺-硫醇(Maleimide-thiol),还原胺化,酰肼-醛(Hydrazide-aldehyde),亲和力捕获等,亦可使用。SensiQ双通道检测中的一个通道可用于生成适当的参照曲线。当表面化学物固定好以后,加入最多250 μl的样品,缓冲液流经生物传感器表面时产生稳定的基线。样品注入和计时通过自动化控制完成。通过实验设置向导功能,用户可记录多次注射周期,并具备高重复性。
蛋白-蛋白、抗体-抗原、蛋白-小分子、抗体-多肽、蛋白-DNA、DNA-DNA、蛋白-纳米材料等分子间相互作用力,检测样品中须有一种是蛋白,且两种样品纯度要求均高。
提供最少样品量:蛋白50-100μg,小分子20μM/200μL,蛋白多肽需低温寄送。
表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)是一种物理现象,当光波在金属和介质界面传播时,金属表面的自由电子会被入射光激发并产生集体振荡。这种现象被广泛应用于分子相互作用分析,如生物传感器、药物筛选和蛋白质相互作用研究等。然而,在使用SPR进行分子相互作用分析时,可能会遇到一些常见问题。以下是一些可能遇到的问题及其解决方案:
信号噪声比低:由于实验环境、设备性能或样品质量等因素,可能导致信号噪声比较高,影响实验结果。解决方法包括优化实验条件(如温度、pH值等)、提高设备性能(如使用高灵敏度的探测器)以及改善样品质量(如提高样品纯度、减少非特异性吸附等)。
基线漂移:基线漂移可能是由于温度波动、溶液流动不稳定或光学元件污染等原因引起的。为了解决这个问题,可以采取措施稳定实验环境(如使用恒温装置)、优化溶液流动条件(如使用蠕动泵控制流速)以及定期清洁光学元件。
样品吸附问题:在某些情况下,样品可能会非特异性地吸附在金属表面,导致实验结果不准确。为了减少非特异性吸附,可以在金属表面修饰一层生物相容性良好的涂层(如聚乙二醇、蛋白质A等),或者优化样品浓度和孵育时间等条件。
金属表面粗糙度:金属表面的粗糙度会影响SPR信号的强度和稳定性。因此,在使用SPR进行分子相互作用分析时,需要保证金属表面具有良好的光洁度和均匀性。这可以通过使用高质量的金属薄膜、严格控制制备工艺以及定期维护设备等方式来实现。
实验重现性:为了确保实验结果的可靠性,需要在不同时间、不同批次和不同实验人员之间保持实验的重现性。这要求实验条件、设备参数和样品处理方法等都要保持一致,并且需要定期对设备进行校准和维护。
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