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荧光显微镜FM
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项目介绍

荧光显微镜是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性研究的工具之一。


项目案例

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样品要求

1、菌液/污泥/污水类样品

① 样品量:5000 rpm离心10 min,可得到绿豆大小沉淀,参考图(1.5 mL离心管)大小的菌体沉淀 

②细菌类需要死活染色/ROS染色的,一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触。

③蛋白/多糖类染色,一般加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存,样品不和冰袋接触。

④污泥类样品可以进行冰切或者刀切,冰切收费50/样。

2、生物膜样品

①样品量:金属/瓷砖/岩石等块体类建议长宽高尺寸不超过1 cm,薄膜类直径尺寸不超过2 cm;且均要求样品表面平整,需要标出拍摄面。

②一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触

③若在爬片上培养生物膜,可将爬片粘于培养皿底部,充满培养基,封口膜密封完全,再4度保存。

3、植物类

①植物类样品可进行简单冰切及刀切,软化等特殊类请走病理组织切片测试项目

 ②一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触

③做过的植物类样品淀粉、胡萝卜,土豆、叶片、根、茎,拟南芥等。

4、需要与细胞共培养的样品:

①块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等

送样量:

1)与细胞的作用方式为直接接触的话,至少1个/种细胞/时间点

2)样本处理方式为浸提的话,可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提,根据浸提方式按量和检测时间点提供;

制样要求:若是需要把细胞接种到材料上的话,金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形,建议制备直径为10-15 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪,默认制备直径为15 mm。

②液体类

送样量:根据测试时样本浓度和检测时间点而定,按照单次检测需要的3-5倍的量寄送;若采用稀释后样本测试,则须告知稀释倍数及工作液浓度;若溶剂为有机溶剂(如DMSO,醇类,酚类等),最高工作液浓度中,溶剂的占比低于0.5%;。

③粉末类

送样量:根据测试时样本浓度和检测时间点而定,按照单次检测需要的3-5倍的量寄送;

1)可溶性粉末:注明溶剂的种类(如无水乙醇,异丙醇,DMSO,培养基,PBS或者生盐水等),当样品对溶剂有特殊需求时,请在送样时附加所需溶剂;

2)不可溶粉末:注明样本性质,灭菌方式,及分散为均匀悬浮液所需必要步骤

5、需要提供清楚激发/发射波长,拍摄倍数等要求,

6、染色剂,标明染料名称和拍摄条件(激发/发射波长)

7、细胞类样品直接拍摄,需要封片后常温避光邮寄。

8、固体类直接拍摄样品建议长宽不超过20mm,厚度不超过10mm,重量不超过10g,一定标出测试面。


常见问题

    荧光显微镜(FM)在使用过程中可能会遇到多种问题,以下是一些常见的问题及其可能的解决方案:

    1.荧光异常:荧光显微镜使用荧光染料或标记的样本进行观察,若出现荧光异常可能是染料或标记物的问题,也可能是显微镜镜头或荧光滤镜的问题。可以尝试更换荧光染料或标记物,或者更换荧光滤镜或镜头进行实验。

    2.成像模糊:成像模糊经常发生于长时间观察或过度曝光的情况下,此外,可能还会是样本移动导致的。可以调整曝光时间,避免超过最大建议曝光时间,同时稳定样本,避免样本移动,使用样本固定装置。

    3.自动对焦失效:自动对焦失效可能会造成成像模糊或者无法成像的问题。若自动对焦失效,可能是镜头转动不良或是样本的高度不一致导致。可以调整镜头,确保其能够自由转动,或者调整样本的高度,尝试多种不同高度的样本,观察是否能自动对焦。

    4.其他问题:除了上述故障之外,荧光显微镜还可能遇到其他问题,例如成像偏移、白平衡不良、成像亮度不足、通道冲突等。可以尝试调整成像位置,确保成像中心位置正确,调整白平衡参数,确保成像色彩正常,调整光源亮度,或者调整荧光通道参数。


 
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