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泛素化（Ubiquitination）是指泛素（一类低分子量的蛋白质）分子在一系列特殊的酶作用下，将细胞内的蛋白质分类，从中选出靶蛋白分子，并对靶蛋白进行特异性修饰的过程。这些特殊的酶包括泛素激活酶，结合酶、连结酶和降解酶等。泛素化在蛋白质的定位、代谢、功能、调节和降解中都起着十分重要的作用。同时，它也参与了细胞周期、增殖、凋亡、分化、转移、基因表达、转录调节、信号传递、损伤修复、炎症免疫等几乎一切生命活动的调控。泛素化与肿瘤、心血管等疾病的发病密切相关。因此，作为近年来生物化学研究的一个重大成果，它已然成为研究、开发新药物的新靶点。
技术路线
客户提供样品经Trypsin酶切，酶切产物由泛素化特异性抗体进行泛素化肽的富集，富集后由高精度质谱分析，分析数据由生物信息学软件进行数据检索。
数据分析
应用领域
1. 植物发育与抗逆；
2. 感染与免疫研究；
3. 衰老再生及退行性疾病。
样品类型 | 样品要求 |
植物叶片 | 湿重≥3g |
植物根茎、木质部、韧皮部等 | 湿重≥5g |
细胞样品 | 细胞量湿重≥5*10⁷ |
组织样品 | 人、动物、微生物湿重≥50mg； |
体液样品 | 血清、血浆体积≥200μl，、脑脊液≥500μl，尿液≥1000μl |
样品处理：样品处理是蛋白质泛素化修饰检测的关键步骤。在取样、保存和处理过程中，需要避免蛋白质的损失、降解和污染。同时，要注意控制样品的处理条件，如温度、pH值、离子强度等，以确保蛋白质的稳定性和泛素化修饰的保留。
抗体选择：在免疫检测法中，抗体的选择至关重要。需要选择特异性高、亲和力强的抗体，以确保准确检测到泛素化修饰的蛋白质。此外，还需要注意抗体的来源、批次差异以及保存条件等因素，以避免影响实验结果。
实验操作：实验操作过程中需要注意细节，如样品的加样量、抗体稀释度、反应时间等。这些因素都可能影响实验结果的准确性和可靠性。因此，需要严格按照实验步骤进行操作，并注意记录实验条件和数据。
结果解读：实验结果需要进行正确的解读和分析。需要注意实验结果的背景值、信号强度、特异性等方面的问题。同时，还需要结合实验目的和背景知识，对实验结果进行合理的解释和推断。
蛋白质泛素化修饰检测需要注意以下几个方面：
总之，在进行蛋白质泛素化修饰检测时，需要注意样品处理、抗体选择、实验操作以及结果解读等方面的问题，以确保实验结果的准确性和可靠性。同时，还需要结合实验目的和背景知识，对实验结果进行合理的解释和推断。
