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免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离, 然后取固定化基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、电场力或其它外力作用下, 使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上, 并且固相化。最后应用免疫覆盖液技术如免疫同位素探针或免疫酶探针等, 对抗原固定化基质膜进行检测和分析。
免疫印迹法（ 以抗原分析为例）基本上可分为抗原分离、抗原印迹和抗原检定三个步骤。在每一步中因采用的具体实验方法不同, 可构成多种免疫印迹分析系统。
免疫印迹法是一项分析抗原、抗体的技术。
它具有下列优点：
1 湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作；
2 固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔；
3 免疫印迹分析只需少量试剂；
4 孵育、洗涤的时间明显减短；
5 可同时制作多个拷贝, 用于多种分析和鉴定；
6 结果以图谱形式可长期保存；
7 免疫探针可通过降低PH值等方法, 象抹去录音磁带一样将探针抹掉, 再换用第二探针进行分析检测。免疫印迹法的应用范围及优点不仅局限于此, 它必将随着这一方法的深入研究而不断发展和完善。
1.WB检测组织量要求为100mg（即黄豆大小）；
2.细胞量要求为10^6及以上，细胞收集方式—— 贴壁细胞：倒掉培养基，pbs清洗2-3次，用细胞刮收集细胞，2000g，离心5min，然后去掉上清液，细胞沉淀干冰运输； 悬浮细胞：2000g，离心5min，然后收集细胞沉淀，干冰运输；
3.血液样本：全血采用EDTA-抗凝管装，至少1ml，4度运输，血清或白细胞采用干冰运输；
无信号或信号弱：
可能原因：抗体不匹配、抗体浓度过低、样本中蛋白质含量低、蛋白降解、转膜效率低、洗膜过度等。
解决方案：优化抗体选择、提高抗体浓度、增加样本量、确保样本新鲜、优化转膜条件、减少洗膜次数或降低洗膜强度。
背景高：
可能原因：封闭不完全、抗体非特异性结合、曝光时间过长等。
解决方案：延长封闭时间、选择合适的封闭液、优化抗体稀释度、降低曝光时间。
条带形状异常（如条带弯曲、断裂等）：
可能原因：凝胶制备不均匀、电泳条件不当、转膜过程中出现问题等。
解决方案：优化凝胶制备过程、调整电泳条件、确保转膜过程中的均匀性和稳定性。
条带位置与预期不符：
可能原因：样本中蛋白质分子量与预期不符、电泳条件不当、转膜过程中出现问题等。
解决方案：重新确认目标蛋白质的分子量、调整电泳条件、检查转膜过程中的问题。
重复性差：
可能原因：实验操作不一致、样本处理不当、试剂批次差异等。
解决方案：确保实验操作标准化、严格控制样本处理过程、使用同一批次的试剂。
蛋白质免疫印迹实验（Western Blot，简称WB）是一种常用的生物化学技术，用于检测蛋白质在样本中的表达水平。在进行WB实验时，可能会遇到一些常见问题，下面列举了一些常见问题及其可能的原因和解决方案：
在进行WB实验时，需要注意实验操作的细节和标准化，同时根据实验结果进行适当的优化和调整。此外，还需要注意试剂的质量和批次差异，以及样本的保存和处理过程，以避免出现常见问题。
