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LC-MS/MS质谱以高效液相色谱作为分离系统,质谱为检测系统。将蛋白酶切消化为肽段混合物,之后这些肽段先经高效液相色谱分离,然后进入质谱部分。经离子源离子化后,再经质量分析器将离子碎片按质量数分开,经检测器得到对应质谱图,通过数据库搜索达到蛋白质鉴定的目的。
蛋白质组学分析:LC-MS/MS是蛋白质组学中的常用技术,它通过高效液相色谱法将蛋白质样品分离纯化,然后利用质谱技术对分离出的蛋白质进行定性、定量和结构分析。通过一级质谱的分子离子峰和二级质谱的碎片离子峰信息,可以准确分析出蛋白质的种类、含量以及结构等信息。
蛋白质测序:在蛋白质测序方面,LC-MS/MS通过酶解将蛋白质转化为多肽混合物,然后利用高效液相色谱分离和串联质谱碎裂多肽片段,通过对每个片段进行质谱分析,获取到大量的MS/MS谱图,这些谱图可用于在蛋白质数据库中搜索匹配的肽序列,从而实现对蛋白质的鉴定。
蛋白质翻译后修饰位点分析:LC-MS/MS技术还可以用于分析蛋白质翻译后的修饰位点,这对于理解蛋白质的功能和调控机制具有重要意义。
定量蛋白质组学:在定量蛋白质组学方面,LC-MS/MS技术依据质谱峰的强度信息,实现对蛋白质的定量检测,有助于研究蛋白质在生物体内的表达水平和变化。
关于样品:可以提供蛋白冻干粉,蛋白溶液或蛋白质胶条;至少需要20ug的蛋白质,纯度>90% ;含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM;蛋白溶液避免SDS等变性剂,表面活性剂,不含tris缓冲体系。
样品运输:请使用足量的干冰运输,并尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
1、LS-MSMS质谱鉴定蛋白性价比如何?
和传统技术相比,LS-MSMS鉴定蛋白具有天然优势,通量高(一次上千种蛋白的鉴定量),鉴定直接高效(针对肽段直接鉴定),相比其他方式性价比高。
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