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靶向脂质组
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项目介绍

产品定义

脂质(Lipids)是一类疏水性或两性小分子,根据脂质代谢途径研究计划LIPID MAPSLipid metabolites and pathways strategy)提出的脂质分类系统将脂质代谢物分为八大类。靶向脂质组学使用LC-MS/MS平台,主要是对覆盖5类型27亚类中的特定脂质分子共计1000+种脂质代谢物进行选择性、特异性的质谱 MRM 定量分析,该方法灵敏度高、准确性高且通量高。


实验流程

脂质组学


检测指标

物质一级分类

物质二级分类

物质数

脂肪酸类

肉碱、游离脂肪酸

40+

甘油脂类

单甘油酯、甘油二酯、甘油三酯

480+

甘油磷脂类

溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、1-烷基,2-酰基磷脂酰乙醇胺、1-烯基,2-酰基磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸

500+

鞘脂类

鞘氨醇、神经酰胺、二氢神经酰胺、葡萄糖神经酰胺、己糖神经酰胺、乳糖神经酰胺、鞘磷脂

10+

固醇脂类

胆固醇、胆固醇酯

20+

总数

1000+


产品优势

1. 以标准品为参照,根据保留时间和质谱图谱的精确匹配获得目标代谢物的相对含量;

2. 对符合规则的离子对进行信号采集,去除不符合规则离子信号的干扰。

3. 具有特异性强、灵敏度高、准确性高的特点。


项目案例

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样品要求
样品类型送样量预处理和保存
动物组织≥200 mgPBS 洗涤去除残留血液和污染物,冲洗干净。用组织剪或手术刀将组织剪切成 1cm3 左右的小块,样品称重,等量分装。液氮速冻, -80°C 保存,干冰运输。
血清≥300 μL收集好的全血室温静置 30-60 min,或者 4°C 放置 2h,3000 g 离心 10 min,取上清,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
血浆≥300 μL收集好的全血加入抗凝剂(推荐采用肝素抗凝剂,不建议采用柠檬酸或者 EDTA),室温静止 30 分钟,1300g-2000g 离心 10min,取上清,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
尿液≥200 μL5000×g 4°C 离心 30-60min,取上清, -80°C 保存,干冰运输。
粪便≥300 mg新鲜粪便样本收集好后,立即用液氮速冻处理15 min,保存至-80℃冰箱
肠道内容物≥300 mg新鲜肠道内容物样本收集好后,立即用液氮速冻处理15 min,保存至-80℃冰箱
乳汁≥200 μL收集母乳,-80°C 保存,干冰运输。
唾液≥500 μL1000g-2000g 4°C 离心 10min,(或使用 0.22μm 滤膜过滤),取上清,-80°C 保存,干冰运输。
淋巴液、脑脊液、羊水、胆汁等体液≥200 μL1000g-2000g 4°C 离心 10min,(或使用 0.22μm 滤膜过滤),取上清,-81°C 保存,干冰运输。
穿刺样品≥500 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物种子、果肉≥200 mg收集样品,样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
草本植物、藻类、蕨类≥200 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物花粉≥50 mg收集样品,样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物体液≥300 μL5000×g 4°C 离心 30-60min,取上清,-80°C 保存,干冰运输。
软体动物组织≥500 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
低等细菌细胞≥10^9离心收集等量菌体(保证每份收集的菌体细胞数量一致!!),采用 PBS 清洗三次,每次清洗后 5000g 4°C离心 5 分钟,完全弃去上清,收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
菌体(真菌类)≥500 mg收集菌体(保证每份收集的菌体数量或者重量一致!!),采用 PBS 清洗三次,每次清洗后 5000g 4°C 离心 5 分钟,完全弃去上清,收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
悬浮培养细胞≥10^7离心收集悬浮细胞(保证每份收集的细胞数量一致!!),采用 PBS 清洗两遍,然后采用生理盐水(0.9%氯化钠溶液)洗一遍, 每次清洗后采用小于 1000g 离心力 4°C 低速离心 3 分钟,完全弃去上清(上述整个过程需尽量迅速操作),收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻后-80°C 保存,干冰运输。
贴壁培养细胞≥10^7收集培养好的贴壁细胞(保证每份收集的细胞数量一致!!)去除干净培养基,采用预冷的 PBS 洗两遍,然后再次加入预冷的PBS,把培养容器中的所有细胞都收集下来(一定要刮取干净!!),收集在 1.5 mL 离心管中, 4°C 低速离心,完全弃去上清(上述整个过程需尽量迅速操作)。细胞沉淀在液氮速冻后-80°C保存,干冰运输。
细胞培养上清≥10 mL1000 g,4°C离心3 分钟,取上清,-80°C 保存,干冰运输。


常见问题
    1. 1、样本采集和处理:样本的采集和处理对于靶向脂质组学研究至关重要。应确保样本的代表性、新鲜性和稳定性,避免在采样和存储过程中发生脂质降解或氧化。在采集样本时,应选择合适的采集方法和容器,并在低温条件下尽快进行处理和分析。

    2. 2、样本制备:在靶向脂质组学研究中,样本的制备过程对于结果的准确性和可靠性至关重要。应选择合适的提取方法,如有机溶剂提取、超声波辅助提取等,以最大限度地提取样本中的脂质成分。同时,还需要进行样本的净化和浓缩,以去除杂质并提高脂质组分的纯度。

    3. 3、仪器选择和条件优化:靶向脂质组学研究需要使用高灵敏度的仪器进行分析,如质谱仪、高效液相色谱仪等。在选择仪器时,应综合考虑仪器的分辨率、灵敏度、稳定性和可重复性等因素。同时,还需要对仪器条件进行优化,如电离方式、扫描范围、碰撞能量等,以获得最佳的检测结果。

    4. 4、数据分析和解释:靶向脂质组学研究产生的大量数据需要进行适当的分析和解释。应选择合适的统计方法和数据分析软件,对数据进行预处理、归一化、差异分析等步骤,以提取有用的信息。同时,还需要结合生物学背景知识进行数据解释,揭示脂质在生物体内的功能和作用机制。

    5. 5、质量控制和重复性验证:在靶向脂质组学研究中,质量控制和重复性验证是确保结果准确性和可靠性的重要手段。应定期进行仪器的校准和维护,确保仪器的稳定性和准确性。同时,还需要对实验过程进行严格的质量控制,如使用内标或外标进行定量、进行平行实验等。此外,还需要对结果进行重复性验证,以评估实验的稳定性和可靠性。


 
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