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特殊染色包括纤维组织染色(masson染色、天狼猩红染色、VG染色等),糖类染色(PAS染色等),神经组织染色(LFB染色、ES染色等),骨相关染色(Von Kossa染色、甲苯胺蓝染色、Goldner三色法染色等),脂质染色(油红O染色),植物标本染色(甲苯胺蓝染色、PBS染色等),具体需求可以联系技术老师。
1.动物解剖后,尽快取材,放入10倍自身体积的固定液中,并选取合适的标本瓶,充分固定24小时以上,取材及固定时避免挤压,造成人为损伤;
2.心肝脾肺肾、肿瘤等常规组织需用4%多聚甲醛固定后送样,眼球、脂肪、睾丸等需用特殊固定液固定,骨头需脱钙后进行实验;
3.送样时备注切片要求,对位置有特殊要求的,如脑。请附带参考图;
4.若需要白片,请备注切片数量;
5.需注明所送样品种属(大鼠、小鼠)及组织类型(如心、肝、脾、肺、肾、肿瘤、肠等),有自带荧光的,备注好荧光类型;
6.拍照请写明拍照倍数、拍照部位,详细描述拍照目的,或可提供相应参考文献;
7.做免疫组化、免疫荧光,需自行提供经过验证的一抗抗体来做,若需要我们提供抗体的,请先联系我们的技术人员咨询实验室是否有相关抗体。
1.切片质量:切片必须完整、均匀、平整、无气泡、无褶皱,有利于染色时的冲洗和切片的牢固附黏。如果切片不平整,会导致染色不均匀,颜色深浅不一。
2.固定和脱水:组织固定要新鲜,离体的组织应尽快进行固定,以防自溶和腐败。固定时间和固定液浓度要适当,避免组织硬化和收缩。脱水要彻底干净,组织块 取材不能太大过厚,以防脱水不完全。
3.染色前的准备:染色前应将切片在适当的缓冲液中浸泡,调节pH值至适宜范围,以防止组织酸化或碱化影响细胞核着色。同时,切片需要通过一系列的酒精浓度 逐渐脱水,并用透明剂如苯酚、二甲苯等进行透明化,以便于染色。
4.染色操作:染色时间长短需要根据染剂对组织的染色作用、室温条件、切片厚薄、固定液的类别、染液的新旧等因素进行调节。染色过程中要控制分色时间,一般在显微镜下观察细胞核染色清楚而细胞质基本无色为佳。分化也是关键步骤,需要掌握好分化时间和分化剂的使用。
5.封片和观察:封片时要用中性树脂,盖片要大于组织块的面积,以防日后褪色。观察时需要在显微镜下观察染色效果,如有需要可进行调整。
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