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一代测序由于操作简便,价格低廉,而且其准确度高,目前仍是测序的金标准。因为这些优势,一代测序仍然是目前应用最广泛的测序方法。我们在保证测序质量的前提下,努力改善测序的工艺流程,提高测序通量,推行自动化。平台拥有数百台Thermo Fisher(以下简称“赛默飞”)旗下的 Applied BiosystemsTM 3730XL测序仪,能做到日处理100,000条以上的常规测序。
业务内容
CE测序:
毛细管电泳测序(Capillary Electrophoresis,CE)是建立在原有的高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳序列分析法的基础上的一种测序方法。 主要是使用毛细管作为为分离通道、以可流动的聚合物为介质、用高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。平台目前使用的ABI 测序仪使用的就是毛细管电泳的测序原理,正常情况下测序的有效测序长度不低于700 bp,一般可达850 bp。
【克隆测序】、【Cosmid/Fosmid/BAC末端测序】、【复杂序列测序】、【STR、T-RFLP、AFLP、MLPA片段长度多态性检测】
技术优势
测序读长较长:平均测序读长较长,正常情况下(特殊样品除外),有效长度不低于700 bp,一般可达到850 bp;
速度快:收到样品后,最快24小时,即可收到测序结果;
有复杂序列测序的能力:可以显著提高ITR测序和Poly(A/T)等难度序列的测序成功率;
测序经验丰富:拥有20多年测序经验;
测序通量高:平均日处理100,000条常规测序;
测序网点遍布全国: 全国数十个测序网点可以保证大部分城市就近安排测序,节约物流时间。
测序质量保证
基于标准化的生产流程和严格的质量控制流程,且在软硬件平台、配套试剂和设备维护保养校准均来自赛默飞原厂支持下。我们在“测序读长”、“测序QV值”和“复杂序列测序成功率”三个方面,给予客户高标准的数据和质量保证。
平均测序读长较长,让您的数据分析更快捷。
坚持使用赛默飞原厂仪器及试剂,正常情况下(特殊样品除外),有效长度不低于700 bp,一般可达到850 bp。
测序QV值:高于中国药典标准,让您的数据更精准。
中国药典规定“对于质粒DNA测序峰图,去除引物后峰图的平均Q值需大于30,Q值小于20,的碱基数占总碱基数的百分比需小于1%;对于PCR产物测序峰图,除需满足上述要求外,还需去除两端低质量序列,且剩余测序峰图的长度需大于PCR产物长度的50%。除特殊样品外,我们的QV值一般都在40以上,符合中国药典规则。
样本类型 | 基本要求 | 其他要求 | 保存/运输条件 | 预处理说明 |
PCR产物(已纯化/未纯化) |
>=30 µl(未纯化) >=10 µl(已纯化) >=100 ng/µl(未纯化) >=50 ng/µl(已纯化) |
| 4°C 冷藏运输 | |
质粒 |
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| 液体质粒:4°C 冷藏运输 干粉质粒:常温运输 | |
菌样(菌液/平板菌落) |
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| 4°C 冷藏运输 | 菌液请放入EP管中,用封口膜封口,避免交叉污染 平板菌落请圈选标记,加缓冲垫以防运输中破损 |
一代测序的注意事项包括:
样品的安全性和无污染:确保样品在现有实验条件下(采取一定防护后)对实验人员本身无伤害,同时样品对室内、室外环境无影响。此外,任何样品除本样品外不得有其他样品的污染,例如植物样本不得有其它植物的污染,不得有病害,不得有虫害;全血样品不得引入取血物种本身携带的病菌、病毒等潜在污染。
样品的标注和信息提供:客户或销售人员应将样本的信息详细说明,所有样品必须标注好关键样品信息。样品信息单必须早于或与样品同时到达公司,以方便样品中心录样,同时也方便项目尽快启动。
样品的质量和数量:确保首次取样的样品质量和数量足够,避免因样品质量不好或数量不足导致项目进度延后。如果因为样品首次取样不足、质量不好或信息单未及时到位造成项目进度延后,需要由客户或销售部承担相关责任。
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