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重组蛋白表达的系统主要分为:
原核蛋白表达系统、酵母蛋白表达系统、哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统和无细胞蛋白表达系统。其中以大肠杆菌表达系统为代表,具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点,缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制,如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠,得到具有生物活性的蛋白的几率较小。异源蛋白质在细菌中表达是使用的主要的蛋白生产系统。大肠杆菌一直是最经济的系统之一。
请提供准确的目的基因序列、需要的载体信息等。
表达体系如何选择?
原核蛋白表达系统:以大肠杆菌表达系统为代表,具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点,缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制,如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠,得到具有生物活性的蛋白的几率较小。
酵母蛋白表达系统:具有表达量高,可诱导,糖基化机制接近高等真核生物,分泌蛋白易纯化,易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解,表达量不可控。
哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统:主要优点是蛋白翻译后加工机制最接近体内的天然形式,最容易保留生物活性,缺点是表达量通常较低,稳定细胞系建立技术难度大,生产成本高。
无细胞蛋白表达系统:是指用含有蛋白合成必需的组分(核糖体,转运RNA,氨酰合成酶,启动/延伸/终止因子,三磷酸鸟苷,ATP,Mg2+和K+)的细胞裂解物在体外进行蛋白合成。无细胞蛋白表达技术适用于制备各种类型的蛋白质,包括难表达蛋白质、毒性蛋白质、复杂蛋白质等。缺点是成本高,目前没有大规模应用。
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