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短链脂肪酸
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项目介绍

产品定义

短链脂肪酸(Short-chain fatty acids , SCFAs)是一组由五个或以下的碳原子组成的饱和脂肪酸。短链脂肪酸一般是由厌氧细菌进行糖酵解制造出来的,SCFA会快速地在胃肠道的上皮细胞被吸收,是肠道细胞的主要能量来源。本方法利用靶向 (GC-SIM) 的分析技术方法进行检测,对粪便/内容物/血液样本中的7种短链脂肪酸进行绝对定量分析。


技术路线

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技术优势

1. 高特异性、高准确性:采用GC-SIM精确定性、绝对定量

2. 专属kit: 专为短链脂肪酸开发

3. 严格质控:内标+外标双重质控,标准品人工校对,标曲R2>0.99


检测指标

编号

代谢物名称

Metabolites

1

乙酸

Acetic acid

2

丙酸

Propanoic acid

3

丁酸

Butyric acid

4

异丁酸

Isobutyric acid

5

戊酸

valeric acid

6

异戊酸

Isovaleric acid

7

己酸

Hexanoic acid


项目案例

数据分析

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应用领域

1. 疾病研究:肠道炎症,结肠癌症等疾病的研究

2. 肠道菌群相关机制研究:SCFAs对代谢调节作用机制


样品要求
样品类型送样量预处理和保存
动物组织≥200 mgPBS 洗涤去除残留血液和污染物,冲洗干净。用组织剪或手术刀将组织剪切成 1cm3 左右的小块,样品称重,等量分装。液氮速冻, -80°C 保存,干冰运输。
血清≥300 μL收集好的全血室温静置 30-60 min,或者 4°C 放置 2h,3000 g 离心 10 min,取上清,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
血浆≥300 μL收集好的全血加入抗凝剂(推荐采用肝素抗凝剂,不建议采用柠檬酸或者 EDTA),室温静止 30 分钟,1300g-2000g 离心 10min,取上清,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
尿液≥200 μL5000×g 4°C 离心 30-60min,取上清, -80°C 保存,干冰运输。
粪便≥300 mg新鲜粪便样本收集好后,立即用液氮速冻处理15 min,保存至-80℃冰箱
肠道内容物≥300 mg新鲜肠道内容物样本收集好后,立即用液氮速冻处理15 min,保存至-80℃冰箱
乳汁≥200 μL收集母乳,-80°C 保存,干冰运输。
唾液≥500 μL1000g-2000g 4°C 离心 10min,(或使用 0.22μm 滤膜过滤),取上清,-80°C 保存,干冰运输。
淋巴液、脑脊液、羊水、胆汁等体液≥200 μL1000g-2000g 4°C 离心 10min,(或使用 0.22μm 滤膜过滤),取上清,-81°C 保存,干冰运输。
穿刺样品≥500 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物种子、果肉≥200 mg收集样品,样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
草本植物、藻类、蕨类≥200 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物花粉≥50 mg收集样品,样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物体液≥300 μL5000×g 4°C 离心 30-60min,取上清,-80°C 保存,干冰运输。
软体动物组织≥500 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
低等细菌细胞≥10^9离心收集等量菌体(保证每份收集的菌体细胞数量一致!!),采用 PBS 清洗三次,每次清洗后 5000g 4°C离心 5 分钟,完全弃去上清,收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
菌体(真菌类)≥500 mg收集菌体(保证每份收集的菌体数量或者重量一致!!),采用 PBS 清洗三次,每次清洗后 5000g 4°C 离心 5 分钟,完全弃去上清,收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
悬浮培养细胞≥10^7离心收集悬浮细胞(保证每份收集的细胞数量一致!!),采用 PBS 清洗两遍,然后采用生理盐水(0.9%氯化钠溶液)洗一遍, 每次清洗后采用小于 1000g 离心力 4°C 低速离心 3 分钟,完全弃去上清(上述整个过程需尽量迅速操作),收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻后-80°C 保存,干冰运输。
贴壁培养细胞≥10^7收集培养好的贴壁细胞(保证每份收集的细胞数量一致!!)去除干净培养基,采用预冷的 PBS 洗两遍,然后再次加入预冷的PBS,把培养容器中的所有细胞都收集下来(一定要刮取干净!!),收集在 1.5 mL 离心管中, 4°C 低速离心,完全弃去上清(上述整个过程需尽量迅速操作)。细胞沉淀在液氮速冻后-80°C保存,干冰运输。
细胞培养上清≥10 mL1000 g,4°C离心3 分钟,取上清,-80°C 保存,干冰运输。


常见问题
    1. 样品准备:确保样品是干燥的,因为水分可能会影响GC-MS的分析结果。如果样品中含有水分,可能需要进行干燥或去除水分的处理。

    2. 衍生化:短链脂肪酸通常是羧酸,不易挥发,因此需要通过衍生化反应转化为易挥发的衍生物,以便进行GC-MS分析。常用的衍生化方法包括酯化、硅烷化等。

    3. 仪器设置:在进行GC-MS分析时,需要选择合适的色谱柱、检测器以及相应的分析条件。例如,选择合适的色谱柱可以实现对不同短链脂肪酸的分离;选择合适的检测器(如电子捕获检测器或质谱检测器)可以提高分析的灵敏度和特异性。

    4. 质量控制:为了确保分析结果的准确性,需要进行质量控制。这包括使用标准品进行定量分析、重复测定样品以及检查仪器状态等。

    5. 数据解析:GC-MS分析会产生大量的数据,需要进行仔细的数据解析。这包括对色谱峰进行识别、计算峰面积、确定短链脂肪酸的种类和浓度等。


 
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