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能量代谢
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项目介绍

产品定义

能量代谢维持着生命体最基本的生命活动,比如植物逆境和动物疾病通常伴随着严重的代谢紊乱,且大多归咎于能量代谢紊乱。能量代谢也影响着免疫细胞的功能和命运,与抗病和免疫应答有关。同时,蛋白质磷酸化的修饰基团来自于ATP,所以能量代谢异常可进一步导致上游蛋白质磷酸化通路的改变,严重影响生物体的各项生理、病理功能。能量代谢组学方法利用基于LC-MS的靶向代谢组方法对能量代谢相关的30多种代谢物进行绝对定量分析。


技术路线

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技术优势

1. 特异性、高准确性:采用MRM技术精确定性、绝对定量

2. 专属kit:高通量检测30多种参与能量代谢通路的代谢物

3. 严格质控:内标+外标,标准品人工校对,标曲R2>0.99


检测指标

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参与能量代谢通路的关键30多种代谢物,主要集中在TCA循环、糖酵解和氧化磷酸化通路。



项目案例

数据分析

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应用领域

糖代谢和能量代谢相关生理和病理研究



样品要求
样品类型送样量预处理和保存
动物组织≥200 mgPBS 洗涤去除残留血液和污染物,冲洗干净。用组织剪或手术刀将组织剪切成 1cm3 左右的小块,样品称重,等量分装。液氮速冻, -80°C 保存,干冰运输。
血清≥300 μL收集好的全血室温静置 30-60 min,或者 4°C 放置 2h,3000 g 离心 10 min,取上清,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
血浆≥300 μL收集好的全血加入抗凝剂(推荐采用肝素抗凝剂,不建议采用柠檬酸或者 EDTA),室温静止 30 分钟,1300g-2000g 离心 10min,取上清,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
尿液≥200 μL5000×g 4°C 离心 30-60min,取上清, -80°C 保存,干冰运输。
粪便≥300 mg新鲜粪便样本收集好后,立即用液氮速冻处理15 min,保存至-80℃冰箱
肠道内容物≥300 mg新鲜肠道内容物样本收集好后,立即用液氮速冻处理15 min,保存至-80℃冰箱
乳汁≥200 μL收集母乳,-80°C 保存,干冰运输。
唾液≥500 μL1000g-2000g 4°C 离心 10min,(或使用 0.22μm 滤膜过滤),取上清,-80°C 保存,干冰运输。
淋巴液、脑脊液、羊水、胆汁等体液≥200 μL1000g-2000g 4°C 离心 10min,(或使用 0.22μm 滤膜过滤),取上清,-81°C 保存,干冰运输。
穿刺样品≥500 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物种子、果肉≥200 mg收集样品,样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
草本植物、藻类、蕨类≥200 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物花粉≥50 mg收集样品,样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
植物体液≥300 μL5000×g 4°C 离心 30-60min,取上清,-80°C 保存,干冰运输。
软体动物组织≥500 mg收集样品,采用 PBS 洗涤去除样品表面泥土或污染物(务必清洗干净!!),样品称重,等量分装,液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
低等细菌细胞≥10^9离心收集等量菌体(保证每份收集的菌体细胞数量一致!!),采用 PBS 清洗三次,每次清洗后 5000g 4°C离心 5 分钟,完全弃去上清,收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
菌体(真菌类)≥500 mg收集菌体(保证每份收集的菌体数量或者重量一致!!),采用 PBS 清洗三次,每次清洗后 5000g 4°C 离心 5 分钟,完全弃去上清,收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻,-80°C 保存,干冰运输。
悬浮培养细胞≥10^7离心收集悬浮细胞(保证每份收集的细胞数量一致!!),采用 PBS 清洗两遍,然后采用生理盐水(0.9%氯化钠溶液)洗一遍, 每次清洗后采用小于 1000g 离心力 4°C 低速离心 3 分钟,完全弃去上清(上述整个过程需尽量迅速操作),收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻后-80°C 保存,干冰运输。
贴壁培养细胞≥10^7收集培养好的贴壁细胞(保证每份收集的细胞数量一致!!)去除干净培养基,采用预冷的 PBS 洗两遍,然后再次加入预冷的PBS,把培养容器中的所有细胞都收集下来(一定要刮取干净!!),收集在 1.5 mL 离心管中, 4°C 低速离心,完全弃去上清(上述整个过程需尽量迅速操作)。细胞沉淀在液氮速冻后-80°C保存,干冰运输。
细胞培养上清≥10 mL1000 g,4°C离心3 分钟,取上清,-80°C 保存,干冰运输。


常见问题

    1、样本制备和处理:如何获取高质量、具有代表性的样本,以及如何处理这些样本以最大程度地保留其代谢物信息,是靶向能量代谢组学研究中的一个关键问题。不合适的样本制备和处理方法可能导致代谢物的损失或变化,从而影响结果的准确性。

    2、代谢物识别和定量:在靶向能量代谢组学研究中,代谢物的识别和定量是关键步骤。然而,由于代谢物的种类繁多、结构复杂,以及代谢过程中可能存在的同位素标记等问题,使得代谢物的准确识别和定量成为一个挑战。

    3、数据分析:靶向能量代谢组学研究通常产生大量的数据,如何对这些数据进行有效分析并从中提取有用的信息是一个重要问题。数据分析方法的选择、数据的预处理、统计分析和生物信息学分析等都是需要考虑的因素。

    4、重复性和可靠性:在靶向能量代谢组学研究中,结果的重复性和可靠性是非常重要的。如何确保实验结果的稳定性和可靠性,以及如何处理实验中的变异和噪声等问题,是研究中需要关注的方面。

    5、生物学意义解释:靶向能量代谢组学研究的结果需要结合生物学背景进行解释。如何将代谢物变化与特定的生物学过程或疾病机制联系起来,以及如何挖掘潜在的生物标志物或治疗靶点等,是研究中需要深入探讨的问题。


 
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