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ESI-MS高分辨率质谱分析蛋白质时,电喷雾得到多电荷信号,然后对信号进行去卷积分析,获得蛋白质精确分子量数值,大于25kDa分子量的蛋白质类物质分子量鉴定推荐高分辨率质谱鉴定策略。可以在变性或非变性条件下进行分析:变性条件适合单抗分子量测定;非变性条件适合Cys-ADC分子量测定、蛋白多聚体、双特异性抗体、抗体-抗原复合物的分子量测定。
单克隆抗体全蛋白质分子量检测
抗体亚基分子量检测
关于样品:样品需要量在10-50ug;纯度>90%;含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM;样本制备过程中尽量避免表面活性剂;样品应溶解在温和的、不含变性剂的溶液中。
样品运输:请使用足量的干冰运输,并尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
质谱法进行分子量检测是一种高效、准确的技术手段,广泛应用于生物化学、生物医学以及药物研发等领域。以下是质谱进行分子量检测的概要:
一、技术原理
质谱法利用不同分子在电场或磁场中的运动行为差异,通过测量离子的质荷比(m/z)来推断分子的质量。在分子量检测中,样品分子被电离成带电粒子,然后经过电场或磁场的加速和偏转,最终到达检测器并记录信号。通过分析这些信号,可以得到样品的分子量信息。
二、主要步骤
样品制备:确保样品的纯度和稳定性,避免杂质干扰。对于复杂样品,可能需要进行蛋白质的富集和纯化。
质谱仪选择与操作:选择合适的质谱仪,如MALDI-TOF或ESI-MS等,并根据仪器说明书严格操作。
质谱数据获取与解析:通过质谱仪获取质谱数据,利用质谱数据处理软件对数据进行解析。注意选择合适的质谱峰、判断信号噪音比以及进行数据标定等步骤,以确保分子量测定的准确性。
三、应用与优势
质谱法分子量检测在生物制品蛋白组学领域具有重要作用。通过准确测定蛋白质的分子量,可以深入了解生物体内蛋白质的结构和功能。此外,质谱法还具有通量高、耗时短、成本及样本需求量低等优势,特别适用于复杂样品的分析。
四、注意事项
样品纯度要求高:质谱法对样品的纯度要求较高,因此在进行分子量检测前,需要对样品进行充分的预处理和纯化。
质谱仪的选择与操作:不同的质谱仪在灵敏度、分辨率和质谱范围等方面有所差异,因此需要根据具体需求选择合适的质谱仪,并严格按照仪器说明书进行操作。
数据解析的准确性:质谱数据的解析过程需要仔细处理,包括选择合适的质谱峰、判断信号噪音比以及进行数据标定等步骤,以确保分子量测定的准确性。
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