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肽段覆盖率
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方法简介
肽段覆盖率是指检测到的肽段氨基酸数量占该蛋白质总氨基酸数量的比例。质谱法对蛋白多肽类药物分子的肽段覆盖率进行分析的基本原理是将蛋白质分子选用特异性蛋白酶进行切割，酶解后的供试品为复杂的肽段组成的混合物，然后经过质谱进行检测，上海拜谱生物为提高肽段覆盖率，在Trypsin酶切进行肽段覆盖率分析的同时，也提供Trypsin、Chymotrypsin、Glu-C三种酶切以提高覆盖率。
样品要求
关于样品：可以提供蛋白冻干粉或蛋白质溶液；至少需要20ug的蛋白质，纯度>90% ；含盐量：挥发性无机盐<20mM，不挥发性无机盐<5mM；蛋白溶液避免SDS等变性剂，表面活性剂，不含tris缓冲体系。
样品运输：请使用足量的干冰运输，并尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。
质谱在测定蛋白多肽类药物肽段覆盖率时的几个要点：
样品制备：对于蛋白多肽类药物，样品制备是质谱分析的关键步骤。合适的样品制备方法应能够保持药物分子的完整性和稳定性，避免在预处理过程中发生降解或修饰。
酶解策略：酶解是将蛋白质转化为多肽片段的关键步骤。选择合适的酶（如胰蛋白酶）以及优化酶解条件，以确保蛋白质分子被充分且均一地切割成较小的多肽片段，从而增加质谱检测的肽段覆盖率。
质谱条件：质谱分析时，需要选择合适的质谱模式（如离子阱质谱、轨道阱质谱等）以及优化质谱参数（如离子源温度、碰撞能量等），以获得高质量的质谱数据，提高肽段的检测灵敏度和分辨率。
数据库比对：获得的质谱数据需要与已知的蛋白质数据库进行比对，以识别肽段序列。数据库的完整性和准确性对于肽段覆盖率的评估至关重要。此外，合适的比对算法和参数设置也能提高比对结果的准确性和可靠性。
软件分析：利用专业的质谱分析软件对原始数据进行处理和分析，包括峰检测、噪声过滤、肽段识别等步骤。这些分析过程对于提高肽段覆盖率至关重要。
