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胆汁酸代谢
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产品定义
胆汁酸（bile acids，BA），为胆汁的主要有机成分，是几种结构类似的类固醇酸的统称，根据来源可以分为初级胆汁酸和次级胆汁酸，具有多种生理和药理功能。胆汁酸代谢组学检测方法利用基于LC-MS的MRM靶向代谢组方法对样本中的30多种胆汁酸进行绝对定量分析。
技术路线
技术优势
1. 高特异性、高准确性：采用MRM技术精确定性、绝对定量
2. 先进平台：Sciex Q-trap质谱，线性范围广
3. 专属kit：高通量检测30多种常见胆汁酸
4. 严格质控：内标+外标双重质控，标准品人工校对
检测指标
编号 | 代谢物名称 | Metabolites |
1 | 甘氨鹅脱氧胆酸 | Glycochenodeoxycholic acid |
2 | 甘氨胆酸 | Glycocholic acid |
3 | 甘氨脱氧胆酸 | Glycodeoxycholic acid |
4 | 甘氨猪脱氧胆酸 | Glycohyodeoxycholic acid |
5 | 甘氨石胆酸 | Glycolithocholic acid |
6 | 甘氨熊脱氧胆酸 | Glycoursodeoxycholic acid |
7 | 牛磺鹅脱氧胆酸 | Taurochenodeoxycholic acid |
8 | 牛磺胆酸 | Taurocholic acid |
9 | α-牛磺鼠胆酸 | Tauro alpha-muricholic acid |
10 | β-牛磺鼠胆酸 | Tauro beta-muricholic acid |
11 | 牛磺猪胆酸 | Taurohyocholic acid |
12 | 牛磺脱氧胆酸 | Taurodeoxycholic acid |
13 | 牛磺猪脱氧胆酸 | Taurohyodeoxycholic acid |
14 | 牛磺石胆酸 | Taurolithocholic acid |
15 | 牛磺熊脱氧胆酸 | Tauroursodeoxycholic acid |
16 | 鹅脱氧胆酸 | Chenodeoxycholic acid |
17 | 胆酸 | Cholic acid |
18 | α-鼠胆酸 | alpha-Muricholic acid |
19 | β-鼠胆酸 | beta-Muricholic acid |
20 | γ-鼠胆酸/猪胆酸 | gamma-Muricholic acid\Hyocholic acid |
21 | 脱氧胆酸 | Deoxycholic acid |
22 | 猪脱氧胆酸 | Hyodeoxycholic acid |
23 | 异石胆酸 | Isolithocholic acid |
24 | 石胆酸 | Lithocholic acid |
25 | 熊脱氧胆酸 | Ursodeoxycholic acid |
26 | ω-鼠胆酸 | omega-Muricholic acid |
27 | 12-酮石胆酸 | 12-Ketolithocholic acid |
28 | 脱氢胆酸 | 3-Dehydrocholic acid |
29 | 6,7-二酮石胆酸 | 6,7-Diketolithocholic acid |
30 | 7-酮脱氧胆酸 | 7-Ketodeoxycholic acid |
31 | 7-酮石胆酸 | 7-Ketolithocholic acid |
32 | 鼠脱氧胆酸 | Murideoxycholic Acid |
33 | 别胆酸 | Allocholic acid |
34 | 原胆酸 | Apocholic acid |
数据分析
应用领域
肝胆疾病、肠炎、肿瘤等研究
| 样品类型 | 送样量 | 预处理和保存 |
| 动物组织 | ≥200 mg | PBS 洗涤去除残留血液和污染物，冲洗干净。用组织剪或手术刀将组织剪切成 1cm3 左右的小块，样品称重，等量分装。液氮速冻， -80°C 保存，干冰运输。 |
| 血清 | ≥300 μL | 收集好的全血室温静置 30-60 min，或者 4°C 放置 2h，3000 g 离心 10 min，取上清，液氮速冻，-80°C 保存，干冰运输。 |
| 血浆 | ≥300 μL | 收集好的全血加入抗凝剂（推荐采用肝素抗凝剂，不建议采用柠檬酸或者 EDTA），室温静止 30 分钟，1300g-2000g 离心 10min，取上清，液氮速冻，-80°C 保存，干冰运输。 |
| 尿液 | ≥200 μL | 5000×g 4°C 离心 30-60min，取上清， -80°C 保存，干冰运输。 |
| 粪便 | ≥300 mg | 新鲜粪便样本收集好后，立即用液氮速冻处理15 min，保存至-80℃冰箱 |
| 肠道内容物 | ≥300 mg | 新鲜肠道内容物样本收集好后，立即用液氮速冻处理15 min，保存至-80℃冰箱 |
| 胆汁等体液 | ≥200 μL | 1000g-2000g 4°C 离心 10min，（或使用 0.22μm 滤膜过滤），取上清，-81°C 保存，干冰运输。 |
| 悬浮培养细胞 | ≥10^7 | 离心收集悬浮细胞（保证每份收集的细胞数量一致！！），采用 PBS 清洗两遍，然后采用生理盐水（0.9%氯化钠溶液）洗一遍， 每次清洗后采用小于 1000g 离心力 4°C 低速离心 3 分钟，完全弃去上清（上述整个过程需尽量迅速操作），收集在 1.5ml 离心管中。液氮速冻后-80°C 保存，干冰运输。 |
| 贴壁培养细胞 | ≥10^7 | 收集培养好的贴壁细胞（保证每份收集的细胞数量一致！！）去除干净培养基，采用预冷的 PBS 洗两遍，然后再次加入预冷的PBS，把培养容器中的所有细胞都收集下来（一定要刮取干净！！），收集在 1.5 mL 离心管中， 4°C 低速离心，完全弃去上清（上述整个过程需尽量迅速操作）。细胞沉淀在液氮速冻后-80°C保存，干冰运输。 |
| 细胞培养上清 | ≥10 mL | 1000 g，4°C离心3 分钟，取上清，-80°C 保存，干冰运输。 |
GC-MS（气相色谱-质谱联用）检测胆汁酸时，可能会遇到一些常见问题，以下是一些可能的挑战及其解决方案：
样品前处理：
问题：胆汁酸是亲水性化合物，不易挥发，需要进行适当的衍生化处理以提高其挥发性。
解决方案：常用的衍生化方法包括硅烷化、酯化等，这些反应需要精确控制条件以确保完全转化，同时避免副产物的生成。
仪器设置：
问题：GC-MS仪器参数（如温度程序、载气流速等）需要针对胆汁酸的特性进行优化。
解决方案：通过试验不同的条件，找到最佳的色谱分离和质谱检测条件，确保胆汁酸的有效分离和准确检测。
背景干扰：
问题：样品中可能存在与胆汁酸结构相似的化合物，这些化合物可能干扰胆汁酸的检测。
解决方案：使用选择性更高的检测器（如离子阱质谱检测器）或优化色谱条件以减少背景干扰。
灵敏度：
问题：胆汁酸在复杂样品中的浓度可能较低，需要高灵敏度的检测方法。
解决方案：使用灵敏度较高的质谱检测器，并结合衍生化技术提高胆汁酸的挥发性，从而提高检测灵敏度。
定量准确性：
问题：定量分析的准确性受到多种因素的影响，如样品处理过程中的损失、仪器响应的波动等。
解决方案：使用内标法或外标法进行定量分析，同时定期进行仪器校准和维护，以确保定量结果的准确性。
数据解析：
问题：GC-MS分析产生的数据量大，需要专业的知识和经验进行解析。
解决方案：使用专业的数据分析软件，结合标准品谱图和文献数据进行比对和解析。
